VE-cadherin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401695

Panoramica

PCDH12 codifica la VE-caderina-2, una molecola di adesione calcio-dipendente arricchita nelle cellule endoteliali vascolari che sostiene giunzioni cellula–cellula stabili e una formazione coordinata della barriera. Interagendo con i complessi caderina–catenina e collegandosi al citoscheletro di actina, la VE-caderina-2 contribuisce all’organizzazione delle giunzioni aderenti, alla polarità endoteliale e alla regolazione della permeabilità durante il rimodellamento angiogenico. La sua attività si integra con programmi di segnalazione che modulano la dinamica giunzionale, incluse vie che influenzano la tensione del citoscheletro e le risposte endoteliali a stimoli infiammatori o meccanici. La deregolazione dell’adesione endoteliale e del controllo di barriera è rilevante per fenotipi di disfunzione vascolare e offre un punto di ingresso meccanicistico per studiare l’integrità del microcircolo in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VE-cadherin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCDH12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCDH12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCDH12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VE-cadherin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCDH12 per lo studio della segnalazione di VE-cadherin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCDH12 critici per la funzione di VE-cadherin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCDH12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCDH12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VE-cadherin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VE-cadherin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCDH12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCDH12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.