VDUP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425098

Panoramica

Txnip codifica la proteina interagente con la tioredossina (VDUP1), un fattore di regolazione redox che si lega alla tioredossina e la inibisce, modulando così le risposte cellulari allo stress ossidativo e la segnalazione sensibile allo stato redox. Nelle cellule di topo, VDUP1 influenza il metabolismo di glucosio e lipidi, la funzione mitocondriale e i programmi infiammatori, con collegamenti riportati alla segnalazione AMPK/mTOR e alla modulazione dell’attività dell’inflammasoma NLRP3. Un’alterata espressione di Txnip è stata associata a fenotipi di stress metabolico e a una segnalazione immunitaria disregolata, rendendolo un nodo utile per studiare come il controllo redox si interfacci con il sensing dei nutrienti e le vie delle citochine. Poiché Txnip risponde a livello trascrizionale a glucosio, stress del reticolo endoplasmatico (ER) e segnali ossidativi, viene spesso analizzato in modelli di disfunzione metabolica e di danno tissutale correlato all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VDUP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Txnip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Txnip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Txnip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VDUP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Txnip per lo studio della segnalazione di VDUP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Txnip critici per la funzione di VDUP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Txnip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VDUP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VDUP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Txnip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VDUP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VDUP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Txnip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Txnip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.