VDAC3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423663

Panoramica

Vdac3 codifica il canale anionico voltaggio-dipendente 3 (VDAC3), un poro a barile β nella membrana esterna mitocondriale che regola lo scambio di metaboliti e ioni tra citosol e mitocondri. Come parte della famiglia VDAC, VDAC3 contribuisce all’accoppiamento della fosforilazione ossidativa, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e al controllo redox-sensibile dell’omeostasi mitocondriale. I processi associati a VDAC3 intersecano la segnalazione dell’apoptosi, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e le vie di controllo qualità dei mitocondri che modellano le risposte cellulari allo stress. Alterazioni della funzione di VDAC3 sono state studiate in contesti di disfunzione mitocondriale, inclusi squilibri bioenergetici e difetti tessuto-specifici collegati a meccanismi di malattie metaboliche e neurodegenerative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vdac3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vdac3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vdac3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VDAC3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vdac3 per lo studio della segnalazione di VDAC3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vdac3 critici per la funzione di VDAC3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vdac3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VDAC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VDAC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vdac3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VDAC3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VDAC3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vdac3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vdac3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.