VCX-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416596

Panoramica

VCX3B codifica VCX-C, un membro della famiglia proteica VCX/Y, arricchita nei tessuti della linea germinale maschile e associata a programmi trascrizionali specifici del testicolo. Le proteine di questa famiglia sono implicate nella regolazione della gestione dell’mRNA e nel controllo post-trascrizionale durante la spermatogenesi, collegando VCX-C a processi quali il metabolismo dell’RNA e la differenziazione delle cellule germinali. VCX3B si trova in una regione del cromosoma X frequentemente coinvolta in variazioni del numero di copie (copy-number variation), il che lo rende rilevante per studi sulla sensibilità al dosaggio e sulla stabilità del genoma. La disregolazione dei geni della famiglia VCX è stata esaminata nel contesto di fenotipi di infertilità maschile e di riarrangiamenti genomici legati al cromosoma X, a supporto di indagini meccanicistiche in modelli di biologia riproduttiva e dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VCX-C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VCX3B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VCX3B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VCX3B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VCX-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VCX3B per lo studio della segnalazione di VCX-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VCX3B critici per la funzione di VCX-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VCX3B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VCX-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VCX-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VCX3B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VCX-C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VCX-C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VCX3B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VCX3B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.