VCPIP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-409332-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VCPIP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VCPIP1 Double Nickase Plasmid (h) e il VCPIP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VCPIP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VCPIP1 Antibody (C-12): sc-515291
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VCPIP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409332-NIC | 20 µg | $410.00 |
VCPIP1 (valosin-containing protein interacting protein 1) codifica un enzima deubiquitinante che si associa all’ATPasi AAA+ VCP/p97 per regolare il controllo di qualità proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso l’attività catalitica del suo dominio OTU, VCPIP1 partecipa alla degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD), al traffico di membrana e alla proteostasi, modificando le catene di ubiquitina su specifici substrati e coordinandone l’elaborazione da parte del macchinario VCP/p97. L’alterazione dell’omeostasi dell’ubiquitina collegata a VCP/p97 è associata alla segnalazione di stress cellulare, a dinamiche organellari compromesse e a vie legate alla neurodegenerazione, rendendo VCPIP1 un nodo rilevante per studiare come il rimodellamento dell’ubiquitina influenzi la resilienza allo stress e le reti di degradazione. La regolazione alterata di queste vie è inoltre studiata nel contesto dell’adattamento delle cellule tumorali allo stress proteotossico e della deregolazione della segnalazione mediata dall’ubiquitina.
VCPIP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VCPIP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VCPIP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VCPIP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VCPIP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.