VCAM-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423659-ACT

Vcam1 codifica la vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1), un recettore di adesione inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline espresso sulle cellule endoteliali attivate e in altri compartimenti stromali. VCAM-1 lega le integrine dei leucociti, come VLA-4 (α4β1), favorendo un’adesione stabile e la migrazione transendoteliale durante l’infiammazione, integrando segnali indotti da citochine, inclusi quelli mediati da TNF/NF-κB e dalle vie responsive a IL-1. Questo asse di adesione modula il traffico delle cellule immunitarie, la permeabilità vascolare e il rimodellamento tissutale, con ampia rilevanza per i fenotipi infiammatori, la patologia vascolare e le interazioni tumore–stroma. La VCAM-1 murina è quindi ampiamente utilizzata per studiare in vivo e in modelli di cellule primarie l’attivazione endoteliale, il reclutamento leucocitario e il crosstalk del microambiente.

VCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Vcam1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Vcam1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Vcam1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VCAM-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Vcam1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VCAM-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VCAM-1 nelle cellule tumorali con espressione di Vcam1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.