Plásmido CRISPR de Activación (m) VCAM-1: sc-423659-ACT

Vcam1 codifica la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1), un receptor de adhesión inducible de la superfamilia de las inmunoglobulinas, expresado en células endoteliales activadas y en otros compartimentos estromales. VCAM-1 se une a integrinas leucocitarias como VLA-4 (α4β1) para favorecer la adhesión firme y la migración transendotelial durante la inflamación, integrando señalización impulsada por citocinas, incluidas las vías dependientes de TNF/NF-κB y las sensibles a IL-1. Este eje de adhesión modula el tráfico de células inmunitarias, la permeabilidad vascular y la remodelación tisular, con amplia relevancia para fenotipos inflamatorios, patología vascular e interacciones tumor–estroma. Por ello, la VCAM-1 murina se utiliza ampliamente para estudiar la activación endotelial, el reclutamiento de leucocitos y el diálogo cruzado del microambiente in vivo y en modelos de células primarias.

VCAM-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Vcam1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VCAM-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Vcam1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Vcam1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VCAM-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Vcam1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VCAM-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VCAM-1 en células tumorales con expresión de Vcam1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.