VCAM-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400135-ACT

VCAM1 codifica la molecola di adesione delle cellule vascolari 1 (VCAM-1), un recettore di adesione inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline espresso sull’endotelio attivato, che media l’adesione stabile dei leucociti e la migrazione transendoteliale tramite il legame con integrine come VLA-4 (α4β1). La sua espressione è fortemente aumentata dalle citochine infiammatorie attraverso le vie di segnalazione NF-κB e MAPK, collegando l’attivazione endoteliale al traffico delle cellule immunitarie, alle modifiche della permeabilità vascolare e all’infiltrazione nei tessuti. VCAM-1 partecipa a programmi di infiammazione vascolare che si intrecciano con le risposte allo stress ossidativo e con le reti di citochine/chemochine. Un’espressione disregolata di VCAM1 è associata a stati infiammatori cronici, allo sviluppo di lesioni aterosclerotiche e alle interazioni immunitarie tra tumore e stroma, rendendolo un utile indicatore molecolare dell’attivazione endoteliale e della biologia del reclutamento leucocitario.

VCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VCAM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VCAM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VCAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VCAM-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VCAM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VCAM-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VCAM-1 nelle cellule tumorali con espressione di VCAM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.