VAChT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401240

Panoramica

SLC18A3 codifica il trasportatore vescicolare dell’acetilcolina (VAChT), una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche che carica l’acetilcolina nelle vescicole secretorie sfruttando il gradiente elettrochimico di protoni vescicolare. Questa fase di impacchettamento vescicolare è essenziale per la neurotrasmissione colinergica quantale nelle giunzioni neuromuscolari e nei circuiti colinergici centrali e periferici. La funzione di VAChT si integra con le vie di sintesi e riciclo dell’acetilcolina, collegando il ciclo presinaptico delle vescicole all’esocitosi regolata e alla segnalazione sinaptica. Un’alterazione del tono colinergico legata a una compromissione dell’immagazzinamento dell’acetilcolina è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerativi, a disfunzioni autonomiche e a disturbi che colpiscono il controllo motorio e la cognizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAChT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC18A3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC18A3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC18A3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAChT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC18A3 per lo studio della segnalazione di VAChT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC18A3 critici per la funzione di VAChT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC18A3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VAChT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VAChT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC18A3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VAChT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VAChT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC18A3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC18A3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.