V-ATPase D1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419255

Panoramica

Atp6v0d1 codifica la subunità D1 del dominio V0 della H\+-ATPasi vacuolare (V-ATPasi), una pompa protonica che guida l’acidificazione di endosomi, lisosomi e altri compartimenti intracellulari nelle cellule di topo. La regolazione del pH dipendente dalla V-ATPasi sostiene l’endocitosi mediata da recettore, il flusso autofagico, la proteolisi lisosomiale e il traffico di membrana, e contribuisce anche all’omeostasi degli organelli accoppiata al sensing dei nutrienti da parte di mTORC1. L’alterazione dei componenti della V-ATPasi è ampiamente associata a difetti nello smistamento vescicolare, a una ridotta capacità degradativa e a cambiamenti negli output di segnalazione che possono influenzare neurodegenerazione, funzione delle cellule immunitarie e adattamento metabolico associato al cancro. Atp6v0d1 rappresenta quindi un nodo utile per studiare come l’acidificazione degli organelli si intersechi con la proteostasi e le vie di risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO V-ATPase D1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atp6v0d1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atp6v0d1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atp6v0d1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina V-ATPase D1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atp6v0d1 per lo studio della segnalazione di V-ATPase D1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atp6v0d1 critici per la funzione di V-ATPase D1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atp6v0d1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atp6v0d1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal V-ATPase D1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR V-ATPase D1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atp6v0d1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atp6v0d1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.