UTY Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416327-ACT

UTY (ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeat gene, legato al cromosoma Y) codifica una proteina nucleare associata alla cromatina della famiglia KDM6, che partecipa al controllo epigenetico dei programmi trascrizionali. Sebbene la sua attività catalitica di demetilasi sia ridotta rispetto ai paraloghi, UTY è implicato nella regolazione degli stati di metilazione dell’istone H3K27, nel rimodellamento della cromatina e nelle reti di espressione genica dello sviluppo. I processi cromatinici dipendenti da UTY si intersecano con la specificazione di linea, la differenziazione delle cellule immunitarie e il mantenimento degli stati trascrizionali nelle cellule in proliferazione. Alterazioni del dosaggio di UTY o della regolazione legata al cromosoma Y sono state studiate nel contesto di fenotipi molecolari con bias di sesso e di disregolazione trascrizionale rilevante per la malattia, incluse modificazioni epigenomiche associate al cancro.

UTY Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UTY senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UTY Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UTY nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UTY, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UTY. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UTY nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UTY nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UTY nelle cellule tumorali con espressione di UTY silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.