UTX Plasmide Double Nickase (m): sc-423635-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UTX Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UTX Double Nickase Plasmid (m) e il UTX Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kdm6a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UTX Antibody (E-8): sc-514859
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UTX Plasmide Double Nickase (m) | sc-423635-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UTX Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423635-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Kdm6a** codifica **UTX**, una demetilasi degli istoni con dominio **JmjC** che rimuove i segni repressivi **H3K27me3** per favorire l’attivazione trascrizionale. UTX svolge un ruolo nel rimodellamento della cromatina e nella regolazione dei geni dello sviluppo, coordinando programmi di specificazione di linea e un ampio controllo epigenetico dell’identità cellulare. Partecipa alla regolazione di enhancer e promotori attraverso interazioni con complessi di tipo **COMPASS** e altri regolatori trascrizionali, collegando la dinamica delle modificazioni istoniche ai processi di differenziamento e proliferazione. La disregolazione degli stati della cromatina dipendenti da **Kdm6a/UTX** è stata associata a traiettorie di sviluppo alterate e a programmi trascrizionali oncogenici, rendendolo un modello utile per studi di epigenetica e di vie rilevanti per la malattia.
UTX Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kdm6a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kdm6a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kdm6a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kdm6a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.