USP18 Plasmide Double Nickase (m): sc-423988-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- USP18 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il USP18 Double Nickase Plasmid (m) e il USP18 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Usp18. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
USP18 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423988-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Usp18* codifica la ubiquitin-specific peptidase 18 (USP18), un enzima di deconiugazione specifico per ISG15 che funge anche da principale regolatore negativo della segnalazione dell’interferone di tipo I. USP18 attenua l’output della via JAK–STAT limitando la segnalazione associata a IFNAR2 e contribuisce a modellare i programmi trascrizionali antivirali e infiammatori a valle dei geni stimolati dall’interferone. Attraverso il controllo dell’ISGilazione e della responsività alle citochine, USP18 influenza l’omeostasi dell’immunità innata, l’attivazione delle cellule mieloidi e l’adattamento allo stress cellulare. Un’attività deregolata di USP18 è stata collegata a risposte interferoniche aberranti rilevanti per l’autoinfiammazione, la biologia delle infezioni e le interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendo *Usp18* un locus utile per studi meccanicistici di fenotipi guidati dall’interferone in modelli murini.
USP18 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Usp18 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Usp18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Usp18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Usp18 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.