USP12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406586

Panoramica

USP12 (ubiquitin-specific peptidase 12) è un enzima deubiquitinante che regola la stabilità proteica e la segnalazione rimuovendo catene di ubiquitina da substrati selezionati. Agisce nel controllo ubiquitina-dipendente dell’omeostasi cellulare, influenzando processi quali il traffico dei recettori, le risposte allo stress e la proteostasi attraverso la modulazione della dinamica del sistema ubiquitina–proteasoma. L’attività di USP12 è stata collegata alla regolazione di nodi chiave della segnalazione, incluse vie associate ad AKT e alla segnalazione del recettore degli androgeni, mettendola in relazione con un controllo dipendente dal contesto della proliferazione e dei programmi trascrizionali. La disregolazione dell’espressione o della funzione di USP12 è stata associata alla biologia tumorale e ad altri disturbi in cui un’alterata “editing” dell’ubiquitina perturba l’ampiezza della segnalazione e il turnover proteico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene USP12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del USP12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto USP12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di USP12 per lo studio della segnalazione di USP12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni USP12 critici per la funzione di USP12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di USP12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal USP12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus USP12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR USP12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia USP12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio USP12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.