USP10 Plasmide Double Nickase (m): sc-423592-NIC

Il gene murino Usp10 codifica l’enzima ubiquitin-specific peptidase 10 (USP10), una deubiquitinasi che inverte il turnover proteico mediato dall’ubiquitina, modulando la durata dei segnali e la proteostasi. USP10 è coinvolto nella regolazione delle reti di risposta allo stress e dei programmi di destino cellulare, modulando la stabilità e il traffico di proteine chiave della segnalazione e influenzando processi quali le risposte al danno al DNA, il turnover legato all’autofagia e la segnalazione infiammatoria. Attraverso il controllo della quantità di proteine dipendente dalla deubiquitinazione, USP10 può incidere sul controllo dei checkpoint, sulla suscettibilità all’apoptosi e sull’adattamento metabolico. Un’attività di USP10 deregolata è stata associata a fenotipi patologici in ambito oncologico e immuno-correlato, rendendo Usp10 un nodo utile per studi meccanicistici della biologia delle vie dell’ubiquitina nei sistemi mammiferi.

USP10 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Usp10 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Usp10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Usp10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Usp10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.