USF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423629

Panoramica

Il fattore di trascrizione upstream 2 (USF-2), codificato dal gene murino *Usf2*, è un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix con dominio leucine zipper che si lega ai motivi E-box per regolare l’attività dei promotori all’interno di reti geniche coinvolte nel metabolismo e nella risposta allo stress. USF-2 partecipa al controllo trascrizionale del metabolismo di glucosio e lipidi, della progressione del ciclo cellulare e dei programmi di differenziamento, e può modulare il contesto della cromatina tramite interazioni con co-regolatori. Nei sistemi murini, un’attività alterata di USF-2 è stata collegata a una disregolazione dell’omeostasi metabolica e a cambiamenti nella segnalazione proliferativa, a supporto della sua rilevanza per studi su vie cardiometaboliche e associate al cancro. *Usf2* è quindi spesso studiato come nodo che collega il sensing dei nutrienti, i circuiti trascrizionali e l’espressione genica specifica di tessuto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usf2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usf2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usf2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USF-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usf2 per lo studio della segnalazione di USF-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usf2 critici per la funzione di USF-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usf2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usf2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USF-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USF-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usf2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usf2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.