USF-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423628-LAC

Il fattore stimolatorio a monte 1 (Upstream stimulatory factor 1, USF-1), codificato nel topo dal gene *Usf1*, è un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix con motivo leucine zipper che si lega a sequenze E-box per coordinare l’espressione genica in risposta agli stimoli. USF-1 contribuisce alla regolazione del metabolismo dei lipidi e del glucosio, delle risposte allo stress ossidativo e della segnalazione infiammatoria attraverso il controllo trascrizionale di enzimi metabolici e geni regolatori. In epatociti e adipociti, l’attività di *Usf1* si integra con programmi trascrizionali sensibili all’insulina e con vie più ampie di omeostasi metabolica. Reti dipendenti da USF-1 deregolate sono state implicate in fenotipi rilevanti per la sindrome metabolica, tra cui alterazioni nella gestione delle lipoproteine e nell’utilizzo del glucosio, a supporto della sua utilità per studi meccanicistici in modelli di malattie cardiometaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale USF-1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Usf1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale USF-1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Usf1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di USF-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Usf1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.