USF-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401345-ACT

USF1 codifica l’upstream stimulatory factor 1 (USF-1), un fattore di trascrizione bHLH–leucine zipper espresso in modo ubiquitario che si lega ai motivi E-box per coordinare programmi genici che controllano il metabolismo di glucosio e lipidi, le risposte allo stress ossidativo e la crescita cellulare. USF-1 regola reti trascrizionali a valle dei segnali nutrizionali e ormonali, integrando input da vie quali il metabolismo insulino‑responsivo e la segnalazione attivata dallo stress, contribuendo così all’omeostasi cellulare. Studi genetici e di espressione hanno associato un’alterata attività di USF1 a dislipidemia, tratti cardiometabolici e, più in generale, a variazioni regolatorie che influenzano l’espressione di geni infiammatori e metabolici. Di conseguenza, USF1 è spesso studiato come nodo trascrizionale che collega la regolazione metabolica alle interazioni gene–ambiente nelle cellule umane.

USF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USF-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USF-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USF-1 nelle cellule tumorali con espressione di USF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.