UPIb Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423620

Panoramica

Upk1b codifica l’uroplachina Ib (UPIb), una proteina di membrana di tipo tetraspanina che si assembla con altre uroplachine per formare le placche di membrana a unità asimmetrica delle cellule “ombrello” uroteliali differenziate. Queste placche supportano l’organizzazione della membrana apicale, l’integrità della barriera e i processi di traffico vescicolare che regolano il rimodellamento della superficie vescicale durante la distensione e la minzione. UPIb partecipa ai programmi di differenziamento epiteliale e all’organizzazione dei microdomini di membrana, collegando l’architettura del citoscheletro alla stabilità delle giunzioni e delle proteine di superficie. I pattern alterati di espressione delle uroplachine sono ampiamente utilizzati come indicatori dello stato dell’urotelio e sono rilevanti negli studi su disfunzione di barriera, infiammazione e trasformazione uroteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIb (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Upk1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Upk1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Upk1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UPIb.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Upk1b per lo studio della segnalazione di UPIb, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Upk1b critici per la funzione di UPIb
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Upk1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UPIb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UPIb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Upk1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UPIb Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UPIb (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Upk1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Upk1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.