ULK1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423606-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ULK1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ULK1 Double Nickase Plasmid (m) e il ULK1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ulk1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ULK1 Antibody (F-4): sc-390904
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ULK1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ULK1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ulk1 nel topo codifica ULK1, una chinasi serina/treonina che agisce come iniziatore centrale della macroautofagia integrando segnali sullo stato dei nutrienti e dell’energia. ULK1 forma un complesso di inizio con ATG13, FIP200/RB1CC1 e ATG101 ed è regolata da AMPK e mTORC1 per controllare la biogenesi degli autofagosomi durante la fame e lo stress cellulare. Attraverso la fosforilazione di fattori autofagici a valle, ULK1 coordina il reclutamento di membrane e i segnali autofagici precoci che influenzano la proteostasi, il controllo di qualità mitocondriale e le risposte immunitarie innate. Un’autofagia dipendente da ULK1 deregolata è stata collegata a neurodegenerazione, biologia delle infezioni, disfunzioni metaboliche e adattamento allo stress associato al cancro, rendendo Ulk1 un bersaglio frequente negli studi di dissezione delle vie di segnalazione.
ULK1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ulk1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ulk1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ulk1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ulk1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.