UGT2B7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404209-ACT

UGT2B7 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasi umana che catalizza la glucuronidazione di diversi substrati endogeni e xenobiotici, aumentando la loro solubilità in acqua e favorendone l’eliminazione cellulare. Questa attività di coniugazione di Fase II si integra con le reti di metabolismo dei farmaci epatiche ed extraepatiche e si coordina con i processi di esportazione mediati da trasportatori nelle vie di detossificazione. Variazioni nell’espressione o nell’attività di UGT2B7 sono associate a differenze interindividuali nella capacità metabolica, influenzando l’esposizione cellulare a composti lipofili bioattivi e le risposte allo stress ossidativo. In quanto nodo chiave della coniugazione con glucuronide, UGT2B7 è spesso studiato in farmacogenomica, tossicologia e modelli di malattie incentrati sul metabolismo, in cui una coniugazione alterata influisce sulla segnalazione cellulare e sull’omeostasi.

UGT2B7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UGT2B7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGT2B7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UGT2B7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UGT2B7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGT2B7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UGT2B7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGT2B7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGT2B7 nelle cellule tumorali con espressione di UGT2B7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.