UGP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408778-ACT

UGP2 umano codifica la UDP-glucosio pirofosforilasi 2, un enzima citosolico che catalizza la formazione reversibile di UDP-glucosio a partire da glucosio-1-fosfato e UTP, fornendo un precursore centrale di zuccheri nucleotidici per la sintesi del glicogeno e la glicosilazione. Controllando la disponibilità di UDP-glucosio, UGP2 influenza il flusso dei carboidrati, la biosintesi di proteoglicani e glicoproteine e un più ampio adattamento metabolico ai segnali legati a nutrienti e stress. Un’attività alterata di UGP2 è stata associata a una gestione del glucosio compromessa e a cambiamenti nei pattern di glicosilazione della matrice extracellulare e delle proteine, con possibili effetti su crescita cellulare, differenziamento e segnalazione. Queste funzioni rendono UGP2 un nodo utile per studiare la riprogrammazione metabolica, la regolazione dipendente dai glicani e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

UGP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UGP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UGP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UGP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UGP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGP2 nelle cellule tumorali con espressione di UGP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.