UFM1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416900-LAC

UFM1 codifica ubiquitin-fold modifier 1, una proteina di tipo ubiquitina‑like che viene coniugata ai substrati tramite la cascata di UFMilazione che coinvolge UBA5, UFC1 e la ligasi E3 UFL1, con rimozione mediata dalle proteasi UFSP. Questa via regola la proteostasi del reticolo endoplasmatico, il controllo qualità associato ai ribosomi e l’adattamento cellulare allo stress, e si interfaccia con processi quali la traduzione proteica, l’autofagia e la segnalazione infiammatoria. La modifica dipendente da UFM1 è stata collegata al mantenimento della funzione della via secretoria e alla sopravvivenza cellulare sotto stress del RE, rendendola rilevante per studi meccanicistici sullo stress proteotossico e sull’omeostasi tissutale. La disregolazione dei componenti della UFMilazione è stata associata a fenotipi di neurosviluppo, difetti ematopoietici e vie correlate al cancro, supportando l’indagine di UFM1 in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale UFM1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di UFM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale UFM1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione UFM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di UFM1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo UFM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.