Partículas Lentivirales de Activación (h) UFM1: sc-416900-LAC

UFM1 codifica el modificador con pliegue de ubiquitina 1, una proteína similar a la ubiquitina que se conjuga a sustratos mediante la cascada de UFMilación en la que participan UBA5, UFC1 y la ligasa E3 UFL1, y cuya reversión depende de proteasas UFSP. Esta vía regula la proteostasis del retículo endoplásmico, el control de calidad asociado a ribosomas y la adaptación al estrés celular, y se conecta con procesos como la traducción proteica, la autofagia y la señalización inflamatoria. La modificación dependiente de UFM1 se ha relacionado con el mantenimiento de la función de la vía secretora y la supervivencia celular bajo estrés del RE, por lo que es relevante para estudios mecanísticos del estrés proteotóxico y la homeostasis tisular. La desregulación de componentes de la UFMilación se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo, defectos hematopoyéticos y vías relacionadas con el cáncer, lo que respalda la investigación de UFM1 en modelos celulares relevantes para enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral UFM1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de UFM1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral UFM1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción UFM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de UFM1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo UFM1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.