UCP4 Plasmide Double Nickase (h): sc-417530-NIC

SLC25A27 codifica la proteina disaccoppiante 4 (UCP4), un trasportatore della membrana mitocondriale interna che modula la perdita di protoni e l’efficienza di accoppiamento mitocondriale, influenzando l’output della fosforilazione ossidativa e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. UCP4 è arricchita nei tessuti neurali ed è collegata alla regolazione del potenziale di membrana mitocondriale, della gestione del calcio e delle risposte cellulari allo stress che influenzano il metabolismo e la sopravvivenza neuronali. Attraverso i suoi effetti sulla bioenergetica mitocondriale, UCP4 si interseca con vie che governano l’equilibrio redox e la morte cellulare programmata, rendendola rilevante per studi sulla neurodegenerazione e sulla vulnerabilità metabolica. Un’espressione o un’attività alterata di UCP4 è stata associata a una deregolazione dell’omeostasi energetica in contesti rilevanti per la malattia, a supporto di indagini meccanicistiche in modelli di cellule umane.

UCP4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC25A27 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC25A27. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC25A27. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC25A27 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.