UCMA Plasmide Double Nickase (h): sc-406716-NIC

UCMA (upper zone of growth plate and cartilage matrix associated) codifica una proteina secreta della matrice extracellulare dipendente dalla vitamina K, nota anche come proteina ricca di Gla (Gla-rich protein, GRP), particolarmente abbondante nella cartilagine e nei tessuti vascolari. UCMA va incontro alla γ-carbossilazione dei residui di glutammato, una modifica post-traduzionale che favorisce il legame del calcio e collega UCMA all’omeostasi dei minerali extracellulari e all’organizzazione della matrice. In biologia muscoloscheletrica, UCMA è associata alla differenziazione dei condrociti, alla maturazione della cartilagine di accrescimento e all’integrità della matrice cartilaginea, intersecando programmi di segnalazione che coordinano l’ossificazione endocondrale e il rimodellamento tissutale. Un’espressione deregolata di UCMA e/o un’alterazione del suo stato di carbossilazione sono state riportate in contesti di calcificazione anomala, degenerazione della cartilagine e patologie articolari infiammatorie, rendendola rilevante per studi meccanicistici della patologia guidata dalla matrice.

UCMA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UCMA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UCMA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UCMA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UCMA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.