UCK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423608

Panoramica

Uck1 codifica la uridina-citidina chinasi 1 (UCK1), un enzima citosolico della via di recupero (salvage) che fosforila uridina e citidina a UMP e CMP, fornendo nucleotidi pirimidinici per la sintesi dell’RNA, la replicazione del DNA e il metabolismo dei fosfolipidi di membrana. Regolando l’equilibrio dei pool nucleotidici, UCK1 influenza la capacità proliferativa, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress legate alle esigenze di replicazione e trascrizione. Nei sistemi murini, l’attività di UCK1 viene spesso studiata insieme alla sintesi de novo delle pirimidine e al trasporto dei nucleosidi per comprendere la riprogrammazione metabolica e i flussi compensatori nell’omeostasi dei nucleotidi. Un metabolismo delle pirimidine alterato è una caratteristica ricorrente di disturbi che coinvolgono proliferazione deregolata e mantenimento del genoma, rendendo Uck1 un nodo utile per studi meccanicistici mirati alle vie metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UCK1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Uck1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Uck1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Uck1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UCK1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Uck1 per lo studio della segnalazione di UCK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Uck1 critici per la funzione di UCK1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Uck1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UCK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UCK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Uck1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UCK1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UCK1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Uck1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Uck1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.