Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Ubiquitin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400526
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ubiquitin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Ubiquitin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ubiquitin Antibody (P4D1): sc-8017
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ubiquitin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400526 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene umano **UBB** codifica l’ubiquitina, una proteina di 76 amminoacidi altamente conservata che viene legata covalentemente ai substrati per regolare il destino delle proteine e la trasduzione del segnale. L’ubiquitinazione controlla la degradazione proteasomiale e segnali non proteolitici attraverso catene legate a K48 e K63, modulando vie che includono il controllo qualità delle proteine, le risposte al danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare, l’endocitosi e la segnalazione dell’immunità innata. L’omeostasi dell’ubiquitina e la proteostasi dipendente dall’ubiquitina sono strettamente connesse alle risposte cellulari allo stress, e la loro disregolazione è spesso implicata in neurodegenerazione, biologia dei tumori e fenotipi infiammatori. Poiché **UBB** contribuisce al pool cellulare di ubiquitina, alterazioni della sua espressione possono influenzare la disponibilità globale di ubiquitina e la dinamica a valle del sistema ubiquitina–proteasoma.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ubiquitin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBB per lo studio della segnalazione di Ubiquitin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni UBB critici per la funzione di Ubiquitin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Ubiquitin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ubiquitin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.