UBE2G2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404851-ACT

UBE2G2 (Ubiquitin-konjugierendes Enzym E2 G2) ist eine humane E2-Ubiquitin-Protein-Ligase, die Ubiquitin von E1-Enzymen auf E3-Ligasen überträgt und dadurch die Ubiquitinierung von Substraten sowie den nachgeschalteten proteasomalen Abbau ermöglicht. Es spielt eine zentrale Rolle in der ER-assoziierten Degradation (ERAD) und der Proteinkontrolle, indem es mit membranverankerten E3-Komplexen zusammenarbeitet, um fehlgefaltete oder regulatorische Proteine zu entfernen und die Proteostase aufrechtzuerhalten. Über diese Funktionen ist UBE2G2 mit zellulären Stressantworten, der Zellzykluskontrolle und Signalwegen verknüpft, die von einem ubiquitinvermittelten Proteinumsatz abhängen. Eine fehlregulierte Ubiquitin-Proteasom-Aktivität und eine veränderte ERAD-Kapazität werden häufig mit der Krebsbiologie sowie mit proteostasebezogenen Defekten in der Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was UBE2G2 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen der Protein-Homöostase macht.

UBE2G2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UBE2G2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UBE2G2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UBE2G2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UBE2G2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UBE2G2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UBE2G2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UBE2G2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UBE2G2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UBE2G2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.