UBE2G2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404851-ACT

UBE2G2 (enzima coniugante dell’ubiquitina E2 G2) è una ligasi E2 dell’ubiquitina–proteina umana che trasferisce l’ubiquitina dagli enzimi E1 alle ligasi E3, consentendo l’ubiquitinazione dei substrati e la successiva degradazione proteasomiale. Svolge un ruolo di primo piano nella degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ER-associated degradation, ERAD) e nel controllo qualità delle proteine, coordinandosi con complessi E3 ancorati alla membrana per eliminare proteine mal ripiegate o regolatorie e mantenere la proteostasi. Attraverso queste funzioni, UBE2G2 si intreccia con le risposte cellulari allo stress, il controllo del ciclo cellulare e vie di segnalazione che dipendono dal turnover mediato dall’ubiquitina. Un’attività ubiquitina–proteasoma deregolata e una capacità ERAD alterata sono spesso collegate alla biologia del cancro e a difetti di proteostasi rilevanti per la neurodegenerazione, rendendo UBE2G2 un nodo utile per studi meccanicistici dell’omeostasi proteica.

UBE2G2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UBE2G2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UBE2G2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UBE2G2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UBE2G2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UBE2G2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UBE2G2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UBE2G2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UBE2G2 nelle cellule tumorali con espressione di UBE2G2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.