UBE2F Plasmide Double Nickase (h): sc-406582-NIC

UBE2F umano codifica un enzima coniugante E2 che indirizza NEDD8 verso i substrati cullin, sostenendo l’assemblaggio e la regolazione delle ligasi cullin–RING e la proteostasi a valle dipendente dall’ubiquitina. Modellando lo stato di neddilazione di specifiche culline, UBE2F influenza il turnover di regolatori chiave della progressione del ciclo cellulare, delle risposte allo stress e della segnalazione del danno al DNA, con effetti sui programmi trascrizionali e sull’omeostasi cellulare. La deregolazione delle vie ubiquitina–proteasoma e della neddilazione è frequentemente implicata nella trasformazione oncogenica e in una diversa tolleranza allo stress, rendendo UBE2F un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo della qualità proteica e sul crosstalk tra vie di segnalazione. L’analisi funzionale di UBE2F può aiutare a chiarire come la neddilazione selettiva delle culline orienti il riconoscimento dei substrati e gli esiti proteolitici nelle cellule umane.

UBE2F Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UBE2F nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UBE2F. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UBE2F. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UBE2F interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.