UBE1L2 Plasmide Double Nickase (h): sc-412489-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UBE1L2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h) e il UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira UBA6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UBE1L2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBE1L2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBA6 codifica l’enzima E1 attivatore dell’ubiquitina UBE1L2, che avvia la coniugazione di ubiquitina e di proteine ubiquitina-simili adenilando l’ubiquitina e trasferendola agli enzimi E2, a supporto della successiva modificazione dei substrati mediata dalle ligasi E3. Questa attività contribuisce a coordinare la proteostasi dipendente dall’ubiquitina, il controllo qualità delle proteine e il turnover regolato di fattori di segnalazione, influenzando così la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la segnalazione dell’immunità innata. UBA6 è inoltre collegato alla via FAT10/UBD tramite l’attivazione di modificatori ubiquitina-simili che modulano la processazione dell’antigene e la segnalazione infiammatoria. La disregolazione dell’attivazione dell’ubiquitina e delle cascate di coniugazione è ampiamente rilevante per i meccanismi alla base della neurodegenerazione, del rimodellamento delle reti di segnalazione associato al cancro e della biologia delle malattie infiammatorie, rendendo UBA6 un bersaglio utile per analizzare le dipendenze dalla via dell’ubiquitina.
UBE1L2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UBA6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UBA6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UBA6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UBA6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.