Ub-RPS27A Plasmide Double Nickase (h): sc-416542-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ub-RPS27A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ub-RPS27A Double Nickase Plasmid (h) e il Ub-RPS27A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RPS27A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ub-RPS27A Plasmide Double Nickase (h) | sc-416542-NIC | 20 µg | $410.00 |
RPS27A codifica una proteina di fusione che viene processata post-traduzionalmente per generare ubiquitina e la proteina ribosomiale S27a della subunità 40S, collegando la proteostasi dipendente dall’ubiquitina con la biogenesi del ribosoma e la traduzione. L’ubiquitina prodotta da Ub-RPS27A contribuisce al turnover proteico tramite il sistema ubiquitina–proteasoma, alla regolazione della segnalazione del danno al DNA e al rimodellamento del proteoma in risposta allo stress. La componente S27a viene incorporata nella subunità ribosomiale piccola e supporta la decodifica dell’mRNA e la capacità traduttiva globale. La disregolazione delle proteine ribosomiali e dell’omeostasi dell’ubiquitina è implicata in alterazioni del controllo della crescita cellulare, nelle risposte allo stress proteotossico e nelle vie di mantenimento del genoma rilevanti per la ricerca su cancro e neurodegenerazione.
Ub-RPS27A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RPS27A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RPS27A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RPS27A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RPS27A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.