U2AF65 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423572

Panoramica

U2af2 codifica U2AF65, un componente essenziale legante l’RNA del fattore ausiliario U2 che riconosce il tratto polipirimidinico nei siti di splicing 3′ e coopera con U2AF35 per reclutare lo snRNP U2 durante le prime fasi dell’assemblaggio dello spliceosoma. Collegando la selezione del sito di splicing alla definizione dell’esone, U2AF65 contribuisce a modellare programmi globali di splicing alternativo che regolano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. La perturbazione dello splicing dipendente da U2AF65 può alterare l’equilibrio tra isoforme in vie che controllano la risposta al danno al DNA e l’apoptosi, rendendo U2af2 un nodo utile per analizzare fenotipi guidati dall’elaborazione dell’RNA. Il riconoscimento deregolato dei siti di splicing e l’attività alterata del complesso U2AF sono ampiamente rilevanti per i meccanismi alla base di anomalie dello sviluppo e del rimodellamento del trascrittoma associato al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO U2AF65 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene U2af2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del U2af2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto U2af2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina U2AF65.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di U2af2 per lo studio della segnalazione di U2AF65, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni U2af2 critici per la funzione di U2AF65
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di U2af2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal U2AF65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal U2AF65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus U2af2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal U2AF65 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR U2AF65 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia U2af2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio U2af2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.