Type II 5-phosphatase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421136

Panoramica

Inpp5b nel topo codifica la 5-fosfatasi di tipo II (INPP5B), una 5-fosfatasi degli inositol polifosfati che idrolizza il fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato e fosfoinositidi correlati, modulando la segnalazione lipidica di membrana. Controllando i pool locali di PIP2, INPP5B influenza vie dipendenti dai fosfoinositidi coinvolte in endocitosi, traffico vescicolare e rimodellamento del citoscheletro di actina, con effetti a valle sulla segnalazione recettoriale e sulla dinamica di membrana. La funzione di INPP5B è strettamente integrata nel più ampio circuito di segnalazione PI3K/PLC e interseca processi di traffico associati alle ciglia e all’apparato di Golgi. Un turnover dei fosfoinositidi deregolato è ampiamente implicato in alterazioni dell’omeostasi cellulare, rendendo Inpp5b un bersaglio utile per studi meccanicistici su fenotipi di segnalazione e trasporto di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Type II 5-phosphatase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Inpp5b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Inpp5b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Inpp5b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Type II 5-phosphatase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Inpp5b per lo studio della segnalazione di Type II 5-phosphatase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Inpp5b critici per la funzione di Type II 5-phosphatase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Inpp5b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Inpp5b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Type II 5-phosphatase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Type II 5-phosphatase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Inpp5b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Inpp5b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.