Type II 5-phosphatase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421136

Descripción general

El gen Inpp5b de ratón codifica la 5-fosfatasa tipo II (INPP5B), una 5-fosfatasa de polifosfatos de inositol que hidroliza el fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato y otros fosfoinosítidos relacionados para modular la señalización lipídica de la membrana. Al controlar los reservorios locales de PIP2, INPP5B influye en vías dependientes de fosfoinosítidos implicadas en la endocitosis, el tráfico vesicular y la remodelación del citoesqueleto de actina, con efectos posteriores sobre la señalización de receptores y la dinámica de membrana. La función de INPP5B está estrechamente vinculada a la circuitería de señalización PI3K/PLC y se cruza con procesos de tráfico asociados a los cilios y al aparato de Golgi. La alteración del recambio de fosfoinosítidos se ha implicado ampliamente en defectos de la homeostasis celular, por lo que Inpp5b es un objetivo útil para estudios mecanísticos de fenotipos de señalización y transporte de membrana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Type II 5-phosphatase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Inpp5b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Inpp5b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Inpp5b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Type II 5-phosphatase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Inpp5b para la investigación de la señalización de Type II 5-phosphatase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Inpp5b críticos para la función de Type II 5-phosphatase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Inpp5b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Inpp5b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Type II 5-phosphatase (m) y el plásmido HDR Type II 5-phosphatase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Inpp5b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Inpp5b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.