Type I 5-phosphatase Plasmide Double Nickase (h): sc-410836-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Type I 5-phosphatase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Type I 5-phosphatase Double Nickase Plasmid (h) e il Type I 5-phosphatase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira INPP5A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Type I 5-phosphatase Plasmide Double Nickase (h) | sc-410836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Type I 5-phosphatase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP5A codifica la 5-fosfatasi di tipo I degli inositolo polifosfati, un enzima citosolico che idrolizza il fosfato in posizione 5 dall’inositolo 1,4,5-trifosfato (IP3) e da fosfati dell’inositolo correlati, ponendo fine alla segnalazione mediata da secondi messaggeri. Limitando la mobilizzazione del calcio dipendente da IP3 dal reticolo endoplasmatico, INPP5A modula processi regolati dal Ca2+ tra cui secrezione, eccitabilità e risposte trascrizionali dipendenti dall’attività. Questo turnover di fosfoinositidi/fosfati dell’inositolo si interseca con la segnalazione collegata a PI3K e con un più ampio controllo omeostatico delle risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di INPP5A sono state implicate in una deregolazione della segnalazione del calcio e vengono studiate nel contesto della neurobiologia e del rimodellamento della segnalazione associato al cancro.
Type I 5-phosphatase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INPP5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INPP5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INPP5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INPP5A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.