twist2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419989

Panoramica

Twist2 codifica un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix (bHLH) che regola i programmi di linea mesenchimale, controllando le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione durante l’embriogenesi e l’omeostasi tissutale. Nel topo, Twist2 influenza reti trascrizionali collegate a processi di tipo transizione epitelio–mesenchimale (EMT), al rimodellamento della matrice extracellulare e al dialogo con vie di segnalazione come TGF-β e Wnt, che modellano la morfogenesi e il comportamento delle cellule stromali. Un’attività alterata di TWIST2 è stata associata ad anomalie dello sviluppo e a risposte infiammatorie e fibrotiche disregolate, rendendolo un nodo utile per studiare i circuiti di regolazione genica nella biologia del tessuto connettivo. I modelli loss-of-function permettono di indagare come Twist2 coordini programmi trascrizionali di repressione/attivazione in fibroblasti, precursori miogenici e compartimenti stromali associati al sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO twist2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Twist2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Twist2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Twist2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina twist2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Twist2 per lo studio della segnalazione di twist2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Twist2 critici per la funzione di twist2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Twist2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal twist2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal twist2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Twist2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal twist2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR twist2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Twist2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Twist2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.