Plásmido CRISPR de Activación (h) twist: sc-400108-ACT

El gen humano **TWIST1** codifica Twist, un factor de transcripción de tipo hélice–bucle–hélice básico (bHLH) que orquesta programas de linaje mesenquimal y regula la transición epitelio–mesénquima (EMT) mediante el control transcripcional de genes implicados en la adhesión celular, la motilidad y la remodelación de la matriz extracelular. TWIST1 integra señales de vías del desarrollo y de respuesta al estrés, incluidas las de TGF-β, WNT/β-catenina y PI3K/AKT, para modular la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. La actividad desregulada de TWIST1 se asocia con una morfogénesis alterada y con estados aberrantes tipo EMT, que se estudian con frecuencia en modelos de progresión tumoral, invasión y metástasis, así como en fibrosis y fenotipos celulares tipo madre. Como regulador nodal de la plasticidad transcripcional, TWIST1 se utiliza ampliamente para explorar redes de regulación génica que gobiernan las transiciones de estado celular.

twist El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TWIST1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

twist El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TWIST1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TWIST1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de twist. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TWIST1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de twist en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía twist en células tumorales con expresión de TWIST1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.