Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TWEAK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423449
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TWEAK Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TWEAK, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TWEAK Antibody (MTW-1): sc-56251
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TWEAK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423449 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Mouse Tnfsf12 codifica TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis), una citochina transmembrana di tipo II della superfamiglia del TNF che può essere rilasciata come ligando solubile e segnala principalmente attraverso il recettore FN14/Tnfrsf12a. L’interazione TWEAK–FN14 regola programmi genici infiammatori e il rimodellamento tissutale attivando le vie canonica e non canonica di NF-κB e modulando la segnalazione MAPK, influenzando sopravvivenza cellulare, apoptosi, proliferazione, migrazione e risposte angiogeniche. Nel topo, questo asse è implicato nelle interazioni tra cellule immunitarie e stroma e nelle risposte al danno, ed è spesso studiato in contesti di infiammazione cronica, fibrosi, neuroinfiammazione e rimodellamento del microambiente tumorale. Poiché TWEAK integra la segnalazione citochinica con i processi di riparazione, rappresenta un nodo utile per analizzare il crosstalk tra mediatori infiammatori e dinamiche della matrice extracellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TWEAK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfsf12 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfsf12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfsf12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TWEAK.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfsf12 per lo studio della segnalazione di TWEAK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tnfsf12 critici per la funzione di TWEAK
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfsf12 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfsf12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TWEAK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TWEAK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfsf12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfsf12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.