TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423405

Panoramica

Nkx2-1 codifica TTF-1 (fattore di trascrizione tiroideo 1), un fattore di trascrizione contenente un homeodominio che orchestra i programmi di specificazione di linea e di differenziamento nella tiroide, nell’epitelio polmonare e in regioni del proencefalo ventrale. NKX2-1 regola reti geniche coinvolte nell’identità epiteliale, nella morfogenesi e nella funzione secretoria, incluse le vie che controllano la produzione di surfattante e la biosintesi degli ormoni tiroidei. Attraverso il legame a enhancer e interazioni cooperative con altri regolatori dello sviluppo, contribuisce a mantenere stati trascrizionali specifici di tessuto e l’accessibilità della cromatina. Un’attività o un’espressione deregolata di NKX2-1 è associata ad anomalie dello sviluppo ed è frequentemente studiata nel contesto della biologia delle malattie tiroidee e polmonari, nonché della tumorigenesi associata alla linea e delle transizioni di destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nkx2-1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nkx2-1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nkx2-1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nkx2-1 per lo studio della segnalazione di TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nkx2-1 critici per la funzione di TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nkx2-1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nkx2-1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nkx2-1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nkx2-1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.