TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400458

Panoramica

NKX2-1 (TTF-1, thyroid transcription factor 1) codifica un fattore di trascrizione homeobox con capacità di legare il DNA, che stabilisce e mantiene i programmi di linea cellulare durante lo sviluppo e nell’età adulta nella tiroide, nell’epitelio polmonare e nel prosencefalo ventrale. Regola reti geniche che controllano la differenziazione epiteliale, l’omeostasi del surfattante e la morfogenesi degli organi, coordinando stati trascrizionali che si intersecano con vie di segnalazione dello sviluppo quali Wnt, BMP e FGF. Nella biologia delle malattie umane, un’alterazione del dosaggio di NKX2-1 o sue mutazioni sono associate a fenotipi congeniti cervello–polmone–tiroide e contribuiscono a un rimodellamento trascrizionale dipendente dal contesto nella patologia polmonare e tiroidea. Poiché NKX2-1 agisce come regolatore maestro dell’identità cellulare, è spesso studiato in modelli di differenziamento, nelle transizioni di stato epiteliale e nei meccanismi di dipendenza di linea in oncologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NKX2-1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NKX2-1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NKX2-1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NKX2-1 per lo studio della segnalazione di TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NKX2-1 critici per la funzione di TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NKX2-1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NKX2-1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NKX2-1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NKX2-1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.