TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400458-ACT

NKX2-1 codifica il fattore di trascrizione omeobox TTF-1 (noto anche come Thyroid Transcription Factor 1), un regolatore determinante della linea cellulare degli organi di origine endodermica che coordina i programmi trascrizionali necessari allo sviluppo e alla differenziazione di tiroide, polmone e prosencefalo. Nella tiroide, NKX2-1 controlla l’espressione di geni coinvolti nella biosintesi degli ormoni e nella polarità epiteliale, mentre nell’epitelio polmonare regola l’omeostasi del surfattante e la maturazione alveolare. NKX2-1 si integra con altre vie di sviluppo, inclusi i segnali WNT, BMP e FGF, per stabilire e mantenere stati di espressione genica specifici del tessuto. Un’attività deregolata di NKX2-1 è associata a fenotipi congeniti tiroidei e respiratori ed è spesso utilizzata come marcatore molecolare e nodo funzionale negli studi sulla biologia delle malattie tiroidee e polmonari, inclusi la plasticità di linea e le reti trascrizionali oncogeniche.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NKX2-1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NKX2-1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NKX2-1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NKX2-1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 nelle cellule tumorali con espressione di NKX2-1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.