TTC7A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412780

Panoramica

TTC7A codifica una proteina contenente ripetizioni tetratricopeptidiche, implicata nell’organizzazione di complessi multiproteici che sostengono la polarità epiteliale e l’omeostasi del citoscheletro. Studi collegano TTC7A a vie di segnalazione legate ai fosfoinositidi e a processi di traffico di membrana che influenzano l’adesione cellulare, la dinamica dell’actina e l’integrità dell’epitelio intestinale. Varianti con perdita di funzione sono state associate a gravi fenotipi intestinali e immunitari a esordio precoce, rendendo TTC7A un utile punto di partenza per analizzare i meccanismi della disfunzione della barriera epiteliale e della disregolazione immunitaria. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di TTC7A può aiutare a indagare il cross-talk tra organizzazione della membrana, risposte allo stress e programmi di differenziamento specifici di linea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TTC7A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TTC7A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TTC7A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TTC7A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TTC7A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TTC7A per lo studio della segnalazione di TTC7A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TTC7A critici per la funzione di TTC7A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TTC7A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TTC7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TTC7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TTC7A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TTC7A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TTC7A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TTC7A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TTC7A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.