TSSK 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423532

Panoramica

Il gene murino **Tssk2** codifica la chinasi proteica serina/treonina 2 specifica del testicolo (TSSK2), una chinasi arricchita nelle cellule germinali implicata nella differenziazione post-meiotica degli spermatidi e negli eventi di rimodellamento molecolare necessari alla maturazione degli spermatozoi. Le chinasi della famiglia TSSK sono associate al controllo, dipendente dalla fosforilazione, dei programmi di spermiogenesi, inclusi la riorganizzazione della cromatina, la dinamica del citoscheletro e l’assemblaggio delle strutture flagellari. L’alterazione della segnalazione TSSK è stata collegata, in modelli sperimentali, a difetti della fertilità maschile e a un funzionamento anomalo degli spermatozoi, rendendo TSSK2 un nodo utile per lo studio della biologia riproduttiva. In quanto chinasi con espressione limitata al testicolo, TSSK2 rappresenta anche un modello per analizzare reti di chinasi specifiche di tessuto e la proteostasi durante le fasi tardive dello sviluppo delle cellule germinali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSK 2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tssk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tssk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tssk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSSK 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tssk2 per lo studio della segnalazione di TSSK 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tssk2 critici per la funzione di TSSK 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tssk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSSK 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSSK 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tssk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSSK 2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSSK 2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tssk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tssk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.