TSPAN7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423425

Panoramica

Tspan7 codifica la proteina tetraspanina TSPAN7, uno scaffold di membrana multipasso che organizza i microdomini arricchiti in tetraspanine e modula la distribuzione e la segnalazione dei recettori partner sulla superficie cellulare. Nel topo, TSPAN7 è implicata nel traffico di membrana, nel rimodellamento del citoscheletro e nei processi di comunicazione cellula–cellula che influenzano lo sviluppo neuronale e l’organizzazione sinaptica, e può anche incidere su programmi di adesione e motilità in altri tipi cellulari. Attraverso interazioni che modellano il clustering dei recettori e la segnalazione a valle, TSPAN7 contribuisce a vie collegate all’endocitosi, alla dinamica dell’actina e alla trasduzione del segnale in compartimenti di membrana specializzati. Una funzione deregolata della rete delle tetraspanine è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e ad alterazioni della connettività cellulare, rendendo Tspan7 un locus utile per studi meccanicistici sulla biologia dei microdomini di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tspan7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tspan7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tspan7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSPAN7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tspan7 per lo studio della segnalazione di TSPAN7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tspan7 critici per la funzione di TSPAN7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tspan7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSPAN7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSPAN7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tspan7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSPAN7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSPAN7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tspan7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tspan7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.