TSPAN1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404815-ACT

TSPAN1 (tetraspanina 1) è una proteina transmembrana a quattro passaggi che organizza microdomini arricchiti in tetraspanine e modula la distribuzione spaziale di recettori partner, integrine e complessi di segnalazione sulla superficie cellulare. Attraverso questi assemblaggi, TSPAN1 può influenzare l’adesione cellulare, la motilità, il traffico di membrana e la segnalazione proliferativa, collegandosi a processi quali l’organizzazione epiteliale e il rimodellamento dinamico della membrana plasmatica. Un’espressione deregolata di TSPAN1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata in relazione all’invasione, a fenotipi associati alla metastasi e a variazioni della risposta alle vie dei fattori di crescita. La sua localizzazione di membrana e il ruolo di scaffolding la rendono un nodo utile per indagare il cross-talk tra recettori e la riorganizzazione delle vie a valle in modelli cellulari umani.

TSPAN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TSPAN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TSPAN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TSPAN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TSPAN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TSPAN1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TSPAN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TSPAN1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TSPAN1 nelle cellule tumorali con espressione di TSPAN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.