tsg 101 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400290-LAC

TSG101 (tumor susceptibility gene 101) codifica tsg101, un componente centrale di ESCRT-I che riconosce i carichi ubiquitinati e coordina lo smistamento endosomiale, la biogenesi dei corpi multivescicolari e la degradazione lisosomiale. Attraverso il rimodellamento di membrana dipendente da ESCRT, TSG101 supporta anche l’abscissione citocinetica e contribuisce alla riparazione della membrana plasmatica e al traffico correlato all’autofagia. Queste attività si intersecano con i processi di downregolazione dei recettori, terminazione del segnale e proteostasi, che influenzano la crescita cellulare e le risposte allo stress. L’espressione deregolata di TSG101 o la disfunzione di ESCRT sono spesso oggetto di studio in biologia del cancro e nelle interazioni ospite–patogeno, in cui gemmazione di membrana e traffico vescicolare risultano alterati.

Le particelle di attivazione lentivirale tsg 101 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TSG101 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale tsg 101 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TSG101, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di tsg 101. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TSG101 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.