TRPM8 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401744-LAC

TRPM8 (Transient Receptor Potential Cation Channel, Unterfamilie M, Mitglied 8) kodiert einen kälte- und mentholempfindlichen, für Ca2+ permeablen Ionenkanal, der in sensorischen Neuronen und anderen Zelltypen als zentraler Detektor für Umgebungsabkühlung und chemische Agonisten dient. Die TRPM8-Aktivität reguliert die Membran-Erregbarkeit und die intrazelluläre Kalziumsignalgebung und beeinflusst dadurch nachgeschaltete Prozesse wie Kinase-Signalwege, transkriptionelle Antworten und Pfade der neurogenen Entzündung. Neben seiner Rolle in der Somatosensorik wird TRPM8 auch mit epithelialer und neuronaler Physiologie in Verbindung gebracht und häufig im Kontext der Schmerzsignalgebung, von Mechanismen peripherer Neuropathien und einer veränderten Kalziumhomöostase untersucht. Eine dysregulierte TRPM8-Expression bzw. Kanalaktivität wurde in mehreren krankheitsrelevanten Zusammenhängen beschrieben, was TRPM8 als molekularen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der sensorischen Transduktion und Ca2+-abhängiger Signalnetzwerke stützt.

TRPM8 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TRPM8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRPM8 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TRPM8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRPM8-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TRPM8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.