TRPC5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423516

Panoramica

Trpc5 codifica TRPC5, un canale cationico non selettivo della famiglia “transient receptor potential canonical” che media l’ingresso di Ca²⁺ in risposta a segnali dipendenti da recettori e da lipidi. TRPC5 partecipa a vie dipendenti dalla PLC a valle di GPCR e recettori tirosin-chinasici, modulando l’eccitabilità di membrana, l’omeostasi del calcio intracellulare e programmi trascrizionali calcio-dipendenti. Nei sistemi murini, TRPC5 è ampiamente studiato nei neuroni e in contesti vascolari/endoteliali, dove influenza la funzione sinaptica, la dinamica dei neuriti, le risposte meccanosensibili e la segnalazione sensibile allo stato redox. Un’attività deregolata di TRPC5 è stata collegata a processi rilevanti per la trasmissione del dolore, comportamenti tipo ansioso, rimodellamento vascolare e meccanismi di danno renale, supportandone l’uso in modelli di neurobiologia, biologia cardiovascolare e fisiopatologia renale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trpc5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trpc5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trpc5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPC5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trpc5 per lo studio della segnalazione di TRPC5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trpc5 critici per la funzione di TRPC5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trpc5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRPC5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRPC5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trpc5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRPC5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRPC5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trpc5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trpc5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.