Troponin I-SS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423457

Panoramica

Tnni1 codifica l’isoforma del muscolo scheletrico lento della troponina I (Troponina I-SS), una subunità inibitoria del complesso della troponina che regola l’interazione actina–miosina in modo dipendente dal Ca²⁺. Modulando la sensibilità del filamento sottile al Ca²⁺ tramite interazioni con troponina C, troponina T e tropomiosina, la Troponina I-SS contribuisce a determinare la cinetica di contrazione e le proprietà di rilassamento nelle fibre ossidative a contrazione lenta. L’espressione di Tnni1 e il cambio di isoforma sono strettamente legati alla maturazione delle miofibre, all’attività neuromuscolare e alle vie di adattamento metabolico che plasmano la performance muscolare e la resistenza. La disregolazione della composizione del complesso della troponina e della gestione sarcomerica del Ca²⁺ è rilevante negli studi su debolezza muscolare, miopatie e rimodellamento associato a invecchiamento o inattività, in cui un’alterata regolazione della contrazione contribuisce al declino funzionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-SS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnni1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnni1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnni1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin I-SS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnni1 per lo studio della segnalazione di Troponin I-SS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnni1 critici per la funzione di Troponin I-SS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnni1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnni1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin I-SS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Troponin I-SS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnni1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnni1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.