Troponin I-FS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423458

Panoramica

Tnni2 codifica la troponina I del muscolo scheletrico rapido (Troponina I-FS), la subunità inibitoria del complesso della troponina che accoppia i segnali di Ca²⁺ al ciclo dei ponti trasversali actina–miosina durante la contrazione. Regolando l’attivazione del filamento sottile attraverso interazioni con la troponina T, la troponina C e la tropomiosina, la Troponina I-FS contribuisce a determinare la cinetica di contrazione, il rilasciamento e la produzione di forza nelle fibre muscolari a contrazione rapida. Questo gene è parte integrante dell’accoppiamento eccitazione–contrazione calcio-dipendente e dell’organizzazione del sarcomero, risultando quindi rilevante per studi sullo sviluppo muscolare, sulla specificazione del tipo di fibra e sul rimodellamento dipendente dall’attività. Un’alterata regolazione della troponina è associata a miopatie scheletriche e disfunzione contrattile, e la perturbazione di Tnni2 fornisce un modello maneggevole per analizzare i meccanismi sarcomerici alla base di fenotipi di debolezza muscolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnni2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnni2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnni2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin I-FS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnni2 per lo studio della segnalazione di Troponin I-FS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnni2 critici per la funzione di Troponin I-FS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnni2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnni2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin I-FS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Troponin I-FS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnni2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnni2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.