Troponin C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403315-ACT

Il gene umano **TNNC2** codifica la troponina C, una subunità regolatrice del complesso della troponina in grado di legare Ca2+, che controlla le interazioni actina–miosina nel muscolo striato. Rilevando i transitori di calcio citosolico tramite motivi EF-hand, la troponina C induce cambiamenti conformazionali del filamento sottile che coordinano l’accoppiamento eccitazione–contrazione e la generazione di forza del sarcomero. La segnalazione del calcio dipendente da TNNC2 si integra con l’assemblaggio miofibrillare e la specializzazione funzionale delle fibre muscolari, influenzando la cinetica contrattile nel muscolo a contrazione rapida. Un’alterata responsività al calcio mediata dalla troponina e la regolazione sarcomerica sono rilevanti per studi su debolezza muscolare, miopatie e fenotipi più ampi di disfunzione del muscolo scheletrico.

Troponin C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNNC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Troponin C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNNC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNNC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Troponin C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNNC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Troponin C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Troponin C nelle cellule tumorali con espressione di TNNC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.