TRMT6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412224

Panoramica

TRMT6 codifica la subunità catalitica del complesso tRNA (adenina(58)-N1)-metiltransferasi, che interagisce con TRMT61A per introdurre la modifica conservata m1A58 nei tRNA citosolici. Questa modifica dell’RNA contribuisce alla stabilità strutturale dei tRNA, all’accuratezza della decodifica e a una traduzione efficiente, collegando l’attività di TRMT6 alla proteostasi e alle risposte cellulari allo stress. Alterazioni della metilazione dei tRNA possono perturbare i programmi di traduzione a livello globale e sono state associate, in diversi sistemi modello, a cambiamenti nella proliferazione e nei meccanismi di mantenimento del genoma. TRMT6 viene quindi studiato nel contesto della regolazione epitranscrittomica dell’RNA, del controllo della traduzione e delle modifiche rilevanti per la malattia nella crescita cellulare e nell’adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRMT6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRMT6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRMT6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRMT6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRMT6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRMT6 per lo studio della segnalazione di TRMT6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRMT6 critici per la funzione di TRMT6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRMT6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRMT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRMT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRMT6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRMT6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRMT6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRMT6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRMT6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.